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如何避免病毒DNA抽提試劑盒的錯(cuò)誤操作

發(fā)布日期： 2018-01-17
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    病毒DNA抽提試劑盒采用可以特異性結(jié)合核酸的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，樣品裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合，在低鹽、高PH值時(shí)DNA從硅膠膜上洗脫下來。本試劑盒用于從小劑量的血液、干血點(diǎn)、血清、微量組織、漱口水、毛發(fā)、微切割組織等微量樣品中提取基因組DNA。
    1.在1.5 mL螺旋蓋塑料離心管(不要使用壓蓋式塑料離心管)中加入0.1-0.2 mL液體樣品。如果病毒需要富集，可以將1.5 mL液體在4℃ 24,000 g冷凍離心60分鐘, 移棄1.3 mL后繼續(xù)操作。
    2.加入0.6 mL病毒DNAOUT溶液，振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘。 
    3.振蕩30秒混勻后加入0.7 mL異丙醇，振蕩30秒混勻后，15,000 g室溫離心15分鐘。 
    4.移棄上清，注意不要觸及管底的DNA沉淀，加入1.0 mL 70% 乙醇，振蕩數(shù)秒后 15,000 g室溫離心5分鐘。 
    5.移棄上清，注意不要觸及管底的DNA沉淀。再短暫離心數(shù)秒, 移棄殘留上清（殘留的乙醇會(huì)影響后續(xù)反應(yīng)）。此時(shí)離心面的管壁上將有可見的膜狀沉淀,加入200 μl 超純水，用移液槍仔細(xì)吹打離心管管底和管壁的膜狀沉淀，使其溶解。溶解液混濁或有少量不溶物是正?，F(xiàn)象，如果溶于200 uL水而樣品使用量不超過PCR體系的1/2時(shí)，不溶物一般不會(huì)影響后續(xù)PCR反應(yīng)。不要離心只取上清使用，因?yàn)椴蝗艹恋砦镏泻蠨NA，必須取混合液使用（哪怕很渾濁）。 
    6.樣品可以直接取適量用于PCR，也可保存于-20℃長(zhǎng)期保存。