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產(chǎn)品名稱:

cDNA文庫構建

產(chǎn)品價格:
廠商性質: 工程商 產(chǎn)品時間: 2020-11-09
cDNA文庫是指某生物某發(fā)育時期所轉錄的全部mRNA經(jīng)反轉錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。標準cDNA文庫構建的基本原理是用 Oligo(dT)作逆轉錄引物,或者用隨機引物,給所合成的cDNA加上適當?shù)倪B接接頭,連接到適當?shù)妮d體中獲得文庫。
 文庫構建流程

1.       樣品QC

 

2.       從總RNA中分離mRNA(原始文庫將采用至少2 µg mRNA進行構建)

 

3.       以帶有NotI酶切位點的oligo(dT)Linker Primer為反轉錄引物,再在雙鏈cDNA的5’端加SalII adaptor

 

4.       NotI酶切、過柱去除小片段

 

5.       將合成的雙鏈cDNA與載體進行連接,連接產(chǎn)物轉化DH10B感受態(tài)細胞

 

6.       cDNA文庫的QC:檢測庫容量(重組子克隆數(shù)目);隨機挑取30個克隆子進行PCR鑒定和雙向測序分析,檢測含插入片段的克隆子比例,檢測平均插入片段大小

 

客戶提供

 

        注明樣品的種屬,收集樣品后,應將樣品立即置于干冰保持低溫運輸。

 

我們提供

 

       含有文庫的甘油菌和質量分析鑒定報告

 

質量保證

 

      文庫含有至少4 x 106個原始克隆

 

       樣品平均插入片斷保證大于1.0 kb

 

     有超過85%的載體含有插入片段

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