1. 樣品QC
2. 從總RNA中分離mRNA(原始文庫將采用至少2 µg mRNA進行構建)
3. 以帶有NotI酶切位點的oligo(dT)Linker Primer為反轉錄引物,再在雙鏈cDNA的5’端加SalII adaptor
4. NotI酶切、過柱去除小片段
5. 將合成的雙鏈cDNA與載體進行連接,連接產(chǎn)物轉化DH10B感受態(tài)細胞
6. cDNA文庫的QC:檢測庫容量(重組子克隆數(shù)目);隨機挑取30個克隆子進行PCR鑒定和雙向測序分析,檢測含插入片段的克隆子比例,檢測平均插入片段大小
客戶提供
注明樣品的種屬,收集樣品后,應將樣品立即置于干冰保持低溫運輸。
我們提供
含有文庫的甘油菌和質量分析鑒定報告
質量保證
文庫含有至少4 x 106個原始克隆
有超過85%的載體含有插入片段